Посмертное взятие анализов у новорожденных. Посмертные биопсии

1. Посмертное взятие крови у новорожденных:
а. Срочно связываются с лабораторией, чтобы выяснить, не осталась ли кровь после предыдущих исследований. Ее следует сохранить. Имеющиеся образцы сыворотки или плазмы центрифугируют и замораживают, также замораживают неиспользованные образцы мочи или спинномозговой жидкости.
б. Связываются с лабораторией для обнаружения любых неиспользованных образцов крови, взятых для скрининга новорожденных.

Если это было сделано ранее, запрашивают результаты скрининга новорожденных, в. В случае непредотвратимости смертельного исхода или отказе родственников от мер по поддержанию жизни новорожденного проводят забор крови для дополнительных исследований:
(1) Высохшие капли крови на фильтровальной бумаге сохраняют при комнатной температуре, не следует использовать пластиковый пакет. Кровь наносят как минимум на две или три карты скрининга новорожденных.

(2) Цельная кровь:
(а) 5 мл в пробирке с гепарином (после центрифугирования в течение 20 мин замораживают при температуре -80 °С).
(б) 5 мл в пробирке с ЭДТА (хранится в течение 48 ч при температуре 4 °С).
(в) 5 мл в пробирке с гепарином натрия (хранится при комнатной или температуре 4 °С в течение 12 часов- используют для хромосомного анализа- не замораживают).

2. Посмертный забор мочи у новорожденных:
а. Используют в целях выявления органических кислот и аминокислот.
б. Собирают путем катетеризации, методом Крида или при пункции мочевого пузыря и сразу замораживают. В случае загрязнения кровью образец центрифугируют, чтобы удалить эритроциты, затем замораживают. После промывания мочевого пузыря небольшим количеством стерильного физиологического раствора можно получить небольшое количество мочи для анализа на органические кислоты.
в. Идеальный объем для исследования составляет 5-10 мл, однако даже намного меньшего количества мочи может быть достаточно. Для анализа мочи на органические кислоты методом газовой хроматографии и масс-спектрометрии достаточно 100 мкл мочи.

3. Посмертное исследование волос у новорожденных:
а. Сохраняют несколько срезанных с головы прядей волос для микроскопического анализа.

4. Посмертное получение СМЖ у новорожденных:
а. При подозрении на метаболические заболевания образец следует взять до наступления летального исхода и сразу заморозить при температуре -80 °С.
б. После смерти СМЖ получают путем прокола переднего родничка с соблюдением мер асептики и антисептики- образец может понадобиться для диагностики инфекционного заболевания.

Видео: ОБЗОР ИГРОВОГО КРЕСЛА DXRACER/ПОБИЛИ DIKTATORA

5. Посмертная биопсия кожи у новорожденных:
а. Используют для микроскопического исследования или получения культуры фибро-бластов. Фибробласты кожи необходимы для хромосомного анализа, выделения ДНК в целях обнаружения мутаций и ферментного анализа. Биопсию следует проводить как можно раньше после наступления летального исхода. Однако в случае взятия образца кожи спустя 2-3 дня после смерти можно получить жизнеспособную культуру клеток. В целях достижения наилучших результатов исследования следует брать несколько маленьких биопсий из разных мест (кожи или фасции).
б. Обрабатывают внутреннюю поверхность предплечья или переднюю поверхность бедра тампонами со спиртом несколько раз.
в. Не следует использовать повидон-йод, поскольку он может ухудшать рост клеток.
г. Используют инструмент для щипковой биопсии размером 3 или 5 мм или скальпель для получения всей толщи кожи. Культуру фибробластов также можно получить из небольшого кусочка изолированной фасции или в результате тонкоигольной аспирационной биопсии.
д. Биоптат помещают в питательную среду, например Хэнкса, среду MEM или в вирусную транспортную среду. При отсутствии таких сред используют стерильный физиологический раствор.
е. Транспортируют образец при комнатной температуре или после охлаждения. Нельзя замораживать.
ж. После получения культуры клетки можно поместить в жидкий азот, где они сохранятся в течение нескольких десятилетий и будут доступны для анализа.

6. Посмертная биопсия мышц у новорожденных:
а. При подозрении на мышечную дистрофию или митохондриальные заболевания проводят биопсию скелетных мышц не позднее 2-4 ч после смерти. Чрескожную или инцизионную биопсию выполняют на месте. Для проведения привлекают невропатолога или хирурга в связи с большим опытом взятия биопсии.

б. Инцизионная биопсия. Производят разрез длиной 2-3 см над квадратной мышцей бедра и обнажают мышцы. Зажимы накладывают до отсечения мышечных волокон, чтобы не вызвать их сокращения. Берут три мышечных волокна. Дальнейшие действия описаны ниже:
(1) Помещают одно мышечное волокно в смоченную в физиологическом растворе салфетку «Telfa» (Kendall Company, Mansfield, MA, USA) и замораживают. Не следует погружать мышечное волокно в физиологический раствор. Это волокно используют для световой микроскопии.
(2) Второй образец опускают в 1,5% глутаровый альдегид/1% формальдегид в 0,12 М буферном растворе Соренсена и помещают в холодильную камеру. При ее отсутствии образец помещают в формалин и оставляют при комнатной температуре. При отсутствии формалина и холодильника образец кладут на пропитанную физиологическим раствором салфетку «Telfa» и охлаждают. Данную мышцу исследуют с помощью световой микроскопии.
(3) Третий образец оборачивают алюминиевой фольгой и быстро замораживают в изопентане (при его наличии). В качестве альтернативы образец можно заморозить в жидком азоте или сухом льду и хранить при температуре -80 °С. Этот образец необходим для анализа ферментов. в. Чрескожная биопсия. Если инцизионную биопсию выполнить невозможно, получают три участка ткани из центральной части квадратной мышцы бедра с помощью чрескожной методики. Для ее выполнения используют биопсийную иглу. С образцами проводят те же действия, которые описаны выше.

7. Посмертная биопсия печени у новорожденных:
а. В случае печеночной недостаточности или при подозрении на врожденный дефект метаболизма проводят биопсию печени сразу после наступления смерти. Выполняют открытую клиновидную или чрескожную биопсию при отказе взятия ткани патологоанатомом во время вскрытия или с согласия родственников на биопсию при отказе от аутопсии. В случае задержки проведения биопсии по каким-либо причинам результаты биохимического анализа даже спустя 72 ч после смертельного исхода могут быть достоверными.
б. Клиновидная биопсия. Производят разрез кожи длиной 2 см ниже края реберной дуги справа. Зажимами поднимают правую долю печени и с помощью скальпеля иссекают кусочек в форме клина. Разрезают ткань на несколько частей объемом 5 мм3 и помещают их в пластиковую криопробирку. Замораживают пробирку в жидком азоте, при его отсутствии используют сухой лед. Хранят при температуре -280 °С.

в. Чрескожная биопсия. Используют иглу Мен-гини (Allegiance Healthcare Corp., McGraw Park, IL, USA) 16-го или 18-го размера, иглу Джамшиди (Pharmaseal- Baxter Healthcare Corp., Valencia, CA, USA), иглу Клацкина 16-го размера (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA), режущую иглу Тру (Travenol Laboratories, Deerfield, IL, USA) или одноразовую пружинную иглу для биопсии печени (Monopty- Bard Peripheral Technologies, Covington, GA, USA).
Укладывают ребенка на спину, помечают место пункции чуть ниже среднеподмышечной линии на уровне 9-10-го ребра. Выполняют разрез кожи длиной 3 мм скальпелем № 11 выше ребра. Присоединяют иглу к шприцу объемом 10 мл, наполненному 5 мл физиологического раствора.
Выпускают из иглы воздух и вводят по направлению печени через разрез биопсийную иглу параллельно поверхности кожи спереди, по направлению к мечевидному отростку, соску или плечу противоположной конечности. Промывают 1 мл физиологического раствора канюлю. Продвигают иглу на 2-3 см, одновременно создавая в шприце отрицательное давление путем потягивания поршня на 1-2 мл. Извлекают иглу со шприцем.
При использовании автоматической пружинной системы создавать отрицательное давление не требуется. Получают несколько образцов ткани печени из середины с помощью биопсийной иглы, продолжают выполнять действия, как описано выше.

8. Плацента и пупочный канатик:
а. При рождении больного ребенка необходимо обязательно отправлять плаценту на патологоанатомическое исследование.
б. Исследование плаценты может обеспечить ключевую информацию о поражении сосудов матери или плода являющихся следствием инфекционного поражения матки или патологической воспалительной реакции или лизосомальных болезнях.
в. С помощью исследования культи пуповины у новорожденного можно определить восходящее воспаление - «входные ворота» инфекционного возбудителя при сепсисе.

Источник: http://meduniver.com