Онкология-

И.У. Оостерхуис, М.К. Мостерт, Л.Х.И. Лоойенга

Роттердам, Нидерланды

источник RosOncoWeb.Ru

Опухоли половых клеток человека представляют собойгетерогенную группу новообразований, происходящих, по-видимому,из примордиальных половых клеток. Они в основном встречаются вгонадах, но могут также образовываться и в определенных внегонадныхсайтах. Такая локализация объясняется миграционными путями примордиальныхполовых клеток, которые образуясь в энтодерме желточного мешка4-х недельных эмбрионов, мигрируют вдоль дорзального мезентерияв область генитальной складки. У мужчин герминогенные опухолимогут развиваться как в яичке, так и крестцово-копчиковом отделе,забрюшинном пространстве, а также в средостенье (Mostofi 1998-Scully 1979 ). У подростков и взрослых (включая лиц старшего возраста)герминогенные опухоли в основном образуются в яичке, в то времякак у новорожденных и детей младшего возраста их главным образомобнаруживают в крестцовом отделе, основнм месте локализации данноготипа опухолей у женщин.

На основании данных гистологии, возраста пациента, а также биологииопухолей все герминогенные опухоли яичка могут быть разделенына три группы (клинико-морфологические категории) (Oosterhuis,Looijenga, et al., 1997):

Герминогенные опухоли новорожденных и детей младшего возраста(GCTI): тератомы и опухоли желточного мешка
Герминогенные опухоли подростков и юношей (TGCT): семиномы и несеминомныеопухоли
Герминогенные опухоли пожилых (SS): сперматоцитные семиномы
В следующих параграфах будут рассмотрены основные характеристикиданных групп, а также современные взгляды на их генетические взаимоотношения.

Герминогенные опухоли яичка новорожденных и детей младшего возраста(GCTI).

GCTI обнаруживаются в раннем детском возрасте с частотой 0.12на 100.000 (Looijenga 1999). В большинстве случаев они возникаютво внегонадных сайтах, преимущественно, в крестцовом отделе (45%),и в редких случаях в яичке (6%). Гистологически GCTI представляютсобой тератомы, или опухоли желточного мешка. Тератомы (TE) являютсядоброкачественными опухолями и поэтому в качестве лечения можетприменяться лишь орхиэктомия. Опухоли желточного мешка возникаютчаще, чем TE (4 : 1) (Harms and Janig 1986), являются злокачественными,и их лечение может потребовать проведения дополнительной химиотерапии.

В отличии от ситуации с герминогенными опухолями яичка подросткови взрослых (TGCT- см. ниже), для которых показано, что их предшественникамиявляются внутриэпителиальные карциномы (carcinoma in situ, CIS)(Skakkebaek et al., 1987), в данном случае убедительных доказательство связи GCTI с CIS не имеется. Герминогенные опухоли крестцово-копчиковогоотдела обычно представляют собой крупные доброкачественные тератомы,появляющиеся вскоре после рождения и отмечающиеся чаще всего улиц женского пола. Дети в возрасте стрше 6-и лет имеют большийриск развития злокачественной опухоли желточного мешка как изпредшествующей тератомы, так и на месте не полностью удаленнойтератомы (Perlman et al., 1994).

Методом проточной цитометрии было показано, что тератомы в основномдиплоидны (Silver et al., 1994- Stock et al., 1995- Hoffner etal., 1994), в то время как опухоли желточного мешка могут бытьанеуплоидными, в большинстве случаев - почти тетраплоидными (Oosterhuiset al., 1989- Kommoss et al., 1990- Perlman, Cushing et al., 1994-Jendery et al., 1995). Разница в плоидности была подтвержденацитогенетически: FISH-анализ и кариотипирование показали отсутствиехромосомных аберраций в тератомах и наличие значительных аберрацийхромосом в опухолях желточного мешка. Связано ли отсутствие хромосомныхаберраций в тератомах с потерей опухолевых клеток в процессе культивирования,пока не известно. Кариотипирование опухолей желточного мешка выявилоаномалии в коротком плече хромосомы 1 (частичная потеря районаp36), длинном плече хромосомы 6, а также аномалии в районе 3p(Kaplan et al., 1979- Oosterhuis et al., 1988- Oosterhuis et al.,1993- Hoffner, Deka et al., 1994- Perlman, Cushing et al., 1994-Bussey et al., 1999). FISH-анализ клеток опухолей желточного мешкаподтвердил наличие аберраций в хромосоме 1, а так же показал изменениечисла копий для хромосом 8, 10, 12, 17 и X (Hu 1992- Stock etal., 1994- Jenderny, Koester et al., 1995- Perlman et al., 1996).

Недавно опухоли желточного мешка из семенников детей раннеговозраста были проанализированы с помощью CGH-технологии. Несмотряна то, что число проанализированных случаев было невелико, в нихбыла выявлена сходная картина хромосомного дисбаланса (вовлеченныерайоны помещены в скобки). Во всех случаях была выявлена потерячасти хромосомного материала областей 4q(23-33) и 6q(16-22), всочетании с приобретением материала в области 20q. По крайнеймере в трех случаях выявлены : потери части хромосомного материалав области 1p(21-31) в сочетании с приобретением хромосомного материалав областях 3p(22-24), 9q(34), 12p(12-13), 17q(22-25), 19q(13)и 22(13).

Кроме четырех опухолей желточного мешка нами были обследованыслучаи прогрессии крестцовых тератом в опухоли желточного мешка.Выявленная картина хромосомных аберраций была очень сходна с таковойдля опухолей яичка. Эти данные хорошо согласуются с более раннимикариотипическими исследованиями (Perlman, Cushing et al., 1994-Bussey, Lawce et al., 1999) и указывают на то, что генетическаяконституция этих опухолей в большей степени определяется гистологией,а не анатомической локализацией.

В одном случае опухоли желточного мешка был показан высокий уровеньамплификации района 12q12-q14 области, как известно, содержащейген MDM2. Известно также, что MDM2 образует комплекс с P53, приводяк ингибированию функции последнего (Haupt et al., 1997- Lane andHall 1997- Midgley and Lane 1997). В связи с этим, используя иммуногистохимическийподход, мы исследовали наличие в данных опухолях MDM2 и P53. Нашиданные показали, что в опухолях желточного мешка и тератомах продуцируютсяMDM2, в то время как продуктов гена P53 обнаружено не было. Соответственно,в этих опухолях не было обнаружено мутаций в экзонах 5-8 генаP53. Эти данные показывают, что инактивация гена P53 в этих опухоляхпроисходит не на генетическом, а на биохимическом уровне (Prives1998).

Поскольку в хромосомные аберрации в тератомах обнаружены не были,наши данные не дают новых сведений о возможных взаимоотношенияхмежду опухолями желточного мешка и тератомами. Предположение отом, что тератомы могут прогрессировать в опухоли желточного мешка,сделанное на основании исследования крестцовых тератом (Gonzalez-Crussi1982), нуждаетс в дальнейшем подтвердении с использованием животныхмоделей (Van Berlo et al., 1990).

Герминогенные опухоли яичка у подростков и взрослых (TGCT)

Гистология, клиническая характеристика и модели прогрессии

Клинически и морфологически TGCT могут быть разделены на дватипа : семиномы (SE) и несеминомы (NS). SE обычно проявляютсяу мужчин в возрасте 35-и лет, в то время как NS как правило проявляетсялет на десять раньше. SE состоят из неопластических аналогов первичныхполовых ктеток. NS могут состоять из эмбриональных тканей (эмбриональнаякарцинома, незрелая и зрелая тератома) и/или внеэмбриональныхтканей (опухоль желточного мешка и хориокарцинома). Из всех TGCT,40% составляют NS, и 50% - SE. Остальные TGCT состоят из компонентовобоих типов опухолей и классифицируются согласно Британской классификациикак смешанные опухоли (CT), или как NS согласно классификацииВОЗ (Mostofi, 1998).

SE обычно менее агрессивны по сравнению с NS, хотя агрессивностьпоследних зависит от гистологического подпипа. Общий уровень вылечиваемостипациентов с TGCT высок, но до сих пор 10% больных умирает от даннойболезни. Процент смертности может быть снижен применением интенсивноголечения. До настоящего времени не существует надежных факторов,способных предсказать результаты лечения (Bokemeyer and Schmoll1995).

Считается, что общим предшественником SE и NS являются CIS (Skakkebaek,Berthelsen et al., 1987), состоящие из интратубулярных раковыхклеток, напоминающих клетки SE. Экстраполяции основанные на наблюденияхпациентов с диагнозом CIS без инвазивного TGCT показывают, чтоCIS всегда прогрессирует в инвазивные TGCT (Giwercman et al.,1993- Burke and Mostofi 1988- Dieckmann and Loy 1993). Первоначальнаяэкспансия CIS клеток обнаруживается как интратубулярная или микроинвазивнаясеминома.

Существуют две основные модели развития CIS в TGCT. Согласноодной различные гистологические варианты TGCT возникают независимо(Sesterhenn 1985), в то время как другая модель предполагает,что SE является промежуточной стадией между CIS и различными несеминомнымиопухолями (Oosterhuis et al., 1989- Oliver 1987). Цитогенетическиеисследования, показавшие наличие одинаковых хромосомных аберрацийв SE и в NE компоненте CT (Van Echten-Arends et al., 1995- Haddadet al., 1988) свидетельствуют в пользу последней модели. Недавновыдвинутая гипотеза о том, что на каждой стадии развития TGCTможет происходить перепрограммирование клеток CIS или семиномыв полипонентные эмбриональные раковые клетки, являющиеся стволовымиклетками несеминомных опухолей, (Oosterhuis et al., 1997) такжене противоречит второй модели. Высказывается предположение, чтошанс перепрограммирования CIS и SE в NS уменьшается с возрастом,что объясняет факт клинического проявления несеминомных опухолейв более раннем возрасте по сравнению с семиномами (Oosterhuis,Castedo et al., 1989).

Хромосомная конституция

Методом проточной цитометрии было показано, что TGCT представляютсобой анеуплоидные клетки, причем клетки SE гипертриплоидны, аклетки NS - гипотриплоидны (Oosterhuis, Castedo et al., 1989-Fossе et al., 1991- el-Naggar et al., 1992). Механизм полиплодидизациив данном случае отличается от такового, описанного для большинствараковых клеток, которые развиваются согласно модели опухолевойпрогрессии, предложенной Nowell (Nowell 1976- Nowell 1986). Этамодель описывает клональную эволюцию популяции опухолевых клеток,начинающуюся с диплоидных клеток, которые развиваются в сторонуувеличения числа наборов хромосом. В случае же TGCT этот механизмсостоит в полиплоидизации с последуюими локальными потерями хромосомногоматериала. Предрасположенность клеток TGCT к полиплоидизации можетбыть связана с их происхождением из первичных половых клеток.Эти клетки могут быть особенно склонны к полиплоидизации, посколькуони обладают высокой митотической активностью и тенденцией к образованиюмехромосомных мостов. Известно, что патогенгез TGCT включает определенныймеханизм образования хромосомных мостов (Gondos 1993).

Полиплоидизация с последующими локальными потерями хромосом вTGCT в результате дают специфический паттерн хромосомных наборов,который выявляется кариотипированием (De Jong et al., 1990- Castedoet al., 1989- Van Echten-Arends et al., 1995). Эти исследованияпоказали, что на фоне триплоидного индекса ДНК в клетках SE иNS имеется избыток хромосом 7, 8, 12 и Х при недостатке хромосом11, 13, 18 и Y. Другими часто встречающимися хромосомными аномалиямиявляются потери хромосом 4, 5 и 9, избыток хромосомы 21. С меньшейчастотой (< 20%) встречаются делеции или аберрации в районах1p21-26- 6q14-25- 7q11-q36 и 12q12-24 (Murty and Chaganti 1998).Однако, эти хромосомные аберрации с одной стороны не всегда обнаруживаютсяв данных типах опухолей, а с другой - обнаруживаются в другихопухолях, указывая на то, что эти события имеют отношение к опухолевойпрогрессии. Несмотря на то, что в SE и NS обнаруживаются однотипныехромосомные пересторойки, специфической чертой SE является значительнобольшее, чем в NS число копий хромосом 7, 15, 19 и 22, нарядус уменьшенным числом копий хромосомы 17 (Van Echten-Arends etal., 1995).

Другой отличительной чертой TGCT является сверхпредствленостькороткого плеча хромосомы 12, наблюдаемая в большинстве случаевв виде изохромосомы i (12p- рис. 4). Данная изохромосома былавпервые описана в 1982 г. (Atkin and Baker 1982). Она обычно обнаруживаетсяв 80% TGCT (De Jong, Oosterhuis et al., 1990). Общность происхожденияобоих хромосомных плечей (Sinke et al., 1993) говорит в пользупреположения, что i (12p) хромосома скорее образовалась в результатенеправильного деления центромеры, чем как результат не-сестринскогохроматидного обмена (Mukherjee et al., 1991). Несмотря на то,что в клетках TGCT всегда присутствуют аберрации 12p, образованиюi хромосомы всегда предшествует полиплоидизация. Доказательствомэтого служит сохранение гетерозиготности по 12p в i-позитивныхTGCT (Geurts van Kessel et al., 1989).

Идея о том, что сверхпредставленность короткого плеча хромосомы12 играет важную роль в развитиии TGCT была подтверждена гибридизациейin situ (Suijkerbuijk et al., 1993- Samaniego et al., 1990). Показанотакже, что сверхпредставленность 12p наблюдается и в i-негативныхTGCT.

Данные кариотипирования. представленные выше получили дальнейшееподтверждение недавними экспериментами с использованием CGH-технологии(Korn et al., 1996- Mostert et al., 1996- Ottesen et al., 1997-Summersgill et al., 1998- Rosenberg et al., 1999).

Более того, амплификация определенной области короткого плечахромосомы 12 в семиномных метастазах (Suijkerbuijk et al., 1994).

Протоонкогены и супрессорные гены

Молекулярные исследования TGCT находятся в начальной стадии.Для болучения большей информации о возможной роли супрессорныхгенов, во многих исследованиях проводился анализ потери гетерозиготности(LOH). Несмотря на то, что получены не всегда согласующиеся данные,в части исследований подтвердились результаты. полученные с помощьюцитогенетических методов, т.е., делеции областей, включающих район1p (Mathew et al., 1994), 5q (Peng et al., 1995- Murty et al.,1994- Peng et al., 1999) and 12q (Murty et al., 1992).

Обнаружены также горячие точки делеций, включающие генs DCC (18q21)и RB1 (13q14) (Murty et al., 1994). Аберрации других протоонкогенови супрессорных генов в TGCT встречаются редко: MYC (c-MYC- 8q24,N-MYC- 2p24), c-KIT (4q11-12) и P53 (17p13) (Lothe et al., 1995),K-RAS (12p12) (Dmitrovsky et al., 1990) и NME1 (17q22) (Schmidtet al., 1997).

На уровне РНК обнаружено увеличение экспрессии таких проктоонкогеновкак: c-KIT (Rajpert-De Meyts and Skakkebжk 1994- Strohmeyer etal., 1995), N-MYC, c-MOS (Shuin et al., 1994), циклин D2 and K-или N-RAS (Houldsworth et al., 1997- Houldsworth et al., 1997).Обнаружено также снижение или отсутствие экспресии таких онкогеновкак: RB, DCC (Murty, Li et al., 1994), INT-2 (Shimogaki et al.,1993- Yoshida et al., 1988) и c-eERB-1 и 2 (Shuin, Misaki et al.,1994).

Поскольку за единственным исключением (Murty et al., 1994) вданных типах опухолей не было обнаружено нестабильности микросателлитныхпоследовательностей, считается. что дефекты репарации генов неиграют роли в пргрессии TGCT (Lothe, Peltomaeki et al., 1995).

Семйные случаи TGCT

Эпидемиологические исследования и анализ сцепления позволяютпредположить, что треть пациентов с TGCT характеризуется генетическойпредрасположенностью (Nicholson and Harland 1995). В несколькихисследованиях делались попытки идентифицировать районы хромосом,несущие чувствительные гены. Анализ сцепления проведенный в 50семьях с использованием 221 маркера (Leahy et al., 1995) показал,что такими районами могут являться определенные области хромосом1, 4 (2 области), 5, 14 и 18. Сравнение полученных результов сданными представленными International Testicular Cancer LinkageConsortium позволяет предположить, что данные гены вероятно локализуютсяв хромосомах 3. 5. 12 и 18. К сожалению, не имеется данных о локализациигенов предрасположенности, что может объясняться генетическойгетерогенностью (действие разных генов проводит к одному конечномурезультату).

Герминогенные опухоли людей старшего возраста

Третий типом герминогенных опухолей, диагносцируемом в яичкеявляется сперматоцитная семинома (SS), как правило обнаруживаемаяу мужчин старше 50-и лет. Подобные опухоли никогда не возникаютво внегонадных сайтах и в большинстве случаев прогноз благоприятный(Talerman 1980- Burke and Mostofi 1993). Фенотипически SS характеризуютсяклеточной гетерогенностью. Морфологически они могут напоминатьSE (Talerman 1980). В отличае от SE, SS являются производнымиболее дифференцированных клеток, а именно, B сперматогониев B(Masson 1946- Romanenko and Persidskii 1983- Rosai et al., 1969).Как правило в случае SS в прилежащей паренхиме не обнаруживаетсяпреинвазивных опухолей (CIS), хотя наличие интратубулярных SSпредполагает, что их предшественником являются преинвазивные опухоли(Muller et al., 1987).

Считается, что SS развиваются незаисимо, хотя на этот счет имеютсянекоторые сомнения. Основываясь на данных о том, что 40% SS являетсяc-KIT позитивными, высказывается предположение, что по крайнеймере некоторые из данных опухолей ведут свое начало от первичныхполовых клеток (Kraggerud et al., 1999). Иммуногистохимическийанализ с использованием PLAP показал гистологические отличия SSот других опухолевых клеток. В этих эксперментах SS характеризовалиськак негативные, в то время как другие герминогенные опухоли былипозитивными (Manivel et al., 1987). Методом прточной цитометриибыло показано. что клетки SS могут быть как диплоидными. так ианеуплоидными (Takahashi 1993). Поскольку данный тип опухолейявляется редким (0.2 на 100.000- Burke and Mostofi 1993), сведенияоб их хромосомной конституции очень скудны.

Первые данные о хромосомной конституции SS были получены в 1973г, когда были описаны 2 случая с 52 и 82 хромосомами соответственно(Atkin 1973). Результаты более поздних работ по определению плоидностиданных типов клеток с использованием разных методов дали противоречивыерезультаты (Talerman et al., 1984- Dekker et al., 1992- Takahashi1993- Looijenga et al., 1994). В наших работах была впервые описанакариограмма SS клеток, показывающая их анеуплоидность и небольшоеколичество структурных аберраций (Rosenberg et al., 1998). Исследованиянашего экспериментального материала а также трех других образцов,включая билатеральные опухоли, с использованием CGH- технологиипоказали, что единственной специфической особенностью SS являетсясверхпредставленность хромосомы 9 (Rosenberg, Mostert et al.,1998). Возможно, что относительная доброкачественность данноготипа опухолей связана с тем, что наблюдаемый хромосомный дисбаланссвязан с целыми хромосомами. Гибридизацией in situ с пробами специфичнымидля X и Y хромосомы была показана гетерогенность популяций опухолевыхклеток. Видимо, это связано с тем, что гистологически эти опухолипредставлены мелкими, средними и крупными клетками (Burke andMostofi 1993- Cummings et al., 1994- Eble 1994- Looijenga, Olieet al., 1994). в каких взаимоотношениях находятся эти клеточныетипы пока не установлено. Предполагается, что в этом отношенииметод микродиссекций и CGH могут быть весьма перспективными (Looijengaet al., 1999).

Предполагается, что SS происходят из сперматгониев B (Masson1946- Rosai et al., 1969- Romanenko and Persidskii 1983). Обнаружениеодинаковых хромосомных аномалий в билатеральных SS ставит подсомнение это предположение. в качестве объяснения обнаруженнымсходствам предлагается предположения о мутациях клеток зародышевыхлиний (de novo, или семейных), или о наличии метастазов. Оба предположенияпредставляются маловероятными, поскольку семейные случаи SS неизвестны, метастазирования чистых SS также никогда не обнаруживалось.Недавно появившаяся новая гипотеза связана с обнаружением в SSклетках c-KIT (SCF) белка, который является маркером первичныхполовых клеток (Manova and Bachvarova 1991). Этот рецептор такжебыл обнаружен в CIS и SE (Strohmeyer et al., 1991- Strohmeyeret al., 1995). Предполагается, что по крайней мере часть SS ведетсвое происхождение от первичных (примордиальных) половых клеток(Kraggerud et al., 1999), в которых мутации происходят до их миграциив гонадные зачатки. Эти разные модели могут также служить объяснениемприсутствия аналогичных хромосомных аберраций в билатеральныхSS. Анализ уровней генной экспресии и особенностей мейоза могутбыть информативными в данном случае.

Патогенетическое родство

Считается, что SS берут свое начало не от CIS, а от первичных(прмордиальных) половых клеток. Дискуссия по поводу общего илинезависимого патогенеза GCTI и TGCT от части связана с обнаружениемCIS-подобных клеток в прилежащей паренхиме GCTI. Существует описаниедвух случаев, в которых предположение о присутствии данных клетокстроится на данных о PLAP-позитивности и морфологии (Jacobsen1992). Эти данные критикуются другими авторами (Parkinson andRamani 1993). Следует отметить, что иммуногистохимический подходне может быть использован для идентификации CIS клеток в паренхимеяичка на первом году жизни, т.к. нормальная паренхима может содержатьPLAP-позитивные половые клетки-предшественники (Jшrgensen et al.,1993). Общий патогенетический путь для GCTI и TGCT представляетсямаловероятным также и в связи с их разной плоидностью.

В тоже время, имеются указания на то, что опухоли желточногомешка яичка детей могут содержать дополнительные копии 12p (Stock,Ambros et al., 1995- Jenderny et al., 1996), и даже i (12p) хромосому,которая детектируется с помощью FISH-методики (Stock, Ambros etal., 1995). Правда, последний результат не подтверждается кариотипированием(Perlman, Cushing et al., 1994). На нашей небольшой выборке мытакже не обнаружили присутствия экстра копий 12p. Мы действительнопоказали наличие в трех из пяти опухолях желточного мешка дополнительныхфрагментов 12p, но эти фрагменты отличались от тех, которые обнаруживаютсяв TGCT. Мы предполагаем, что в ряде случаев обнаружения опухолейс i (12p) у детей речь идет об опухолях взрослого типа у мальчиковс ранним половым созреванием.

Дополнительными свидетельствами в пользу независимого патогенезаGCTI и TGCT являются данные эпидемиологических и иммуногистохимическихисследований. В отличае от TGCT, подъема частоты GCTI не наблюдается.В то время как P53 белок обнаруживается в клетках TGCT (Schenkmanet al., 1995- Guillou et al., 1996), он не детектируется в GCTIклетках.

Описаны животные модели GCTI и TGCT. Тератокарциномы мыши вероятнеевсего передставляют модель GCTI (Walt et al., 1993), демонстрируяту же , способность пргрессировать в опухоли желточного мешка(van Berlo et al., 1990). Семиномы собак вероятнее всего представляютмодель SS опухолей человека (Looijenga, Olie et al., 1994). Отсутствиеживотных моделей TGCT подчеркивает специфичность данного типаопухолей для человека.

Таким образом, представленные данные подтверждают независимыегенетические пути GCTI, TGCT и SS.

Амплификация 12p в TGCT

Данные кариотипирования, FISH- и CGH-анализов показывают наличиев TGCT дополнительных доз целого короткого плеча хромосомы 12.В большинстве случаев это событие детектируется как присутствиеi(12p). FISH- аназиз с использованием центромеро-специфическойпробы в качестве гибридизационного зонда считается подходящимметодом для детектирования i(12p) в интерфазном ядре (Mukherjeeet al., 1991- Rodriquez et al., 1992). Хотя согласно нашим даннымэтот метод не является достаточно надежным, он может быть усовершенствовандополнительным применением FISH с двумя гибридизационными пробами,специфичными к центромере и к короткому плечу хромосомы 12. Дляэтих целей могут быть также успешно использованы цветные зонды,специфичные к короткому и длинному плечу хромосомы 12 (Bloughet al., 1997- Blough et al., 1998).

Хотя образование изохромосомы 12 и не является первой стадиейпатогенеза TGCT (Geurts van Kessel et al., 1989), постоянное присутствиеэтих структур в клетках инвазивных опухолей указывает на то, чтоприсутствие экстра копий генов расположенных в коротком плечехромосомы 12 играет важную роль в развитии этого типа опухолей.Идентифицировать гены, вовлеченные в этот процесс очень трудно,поскольку размер короткого плеча составляет 40 Mb, и оно содержит2000 - 4500 генов (http://ncbi.nlm.nih.gov/genemap). Нами,а также рядом других авторов были описаны TGCT опухоли, в клеткахкоторых обнаруживались амплификации ограниченных районов 12p (Suijkerbuijket al., 1994- Korn, Olde Weghuis et al., 1996- Mostert, Van dePol et al., ). Можно предположить, что если важные с точки зренияразвития рака гены распологаются в амплифицируемом районе, тоизучение TGCT с такими амплификациями и без них может пролитьсвет на биологическую роль экстра дозы 12p в развитии TGCT. Сэтой целью мы исследовали амплификацию 12p в ряде TGCT опухолей.Данная амплификация была обнаружена в 8% случаев, в основном вSE. Следует также отметить, что в клетках с амплификацией не обнаруживалисьi хромосомы. Данный факт указывает на то, что существуют два альтернативныхмеханизма приобретения дополнительных копий 12p. которые связаныс биологией данных опухолей.

FISH- анализ показал. что наличие 12p амплификации ассоциированос инвазивным ростом. Показано наличие 12p амплификации в инвазивныхопухолях, микро-инвазивных клетках SE, но не в CIS. Присутствиеданной хромосомной аберрации практически во всех SE указываетна два возможных в этих случаях пути развития - рост или ингибированиеапоптоза. Последняя воможность подтверждена с помощью ДНК-фингерпринтинга(Olie et al., 1996) и анализом выживаемости клеток in vitro. Следуетотметить. что SE с амплификацией 12p возникают в более раннемвозрасте. Корреляции с клинической стадией болезни и с результативностьюлечения отмечено не было. Амплификация 12p не имеет прогностическогозначения для NS.

Несмотря на то, что описана достаточно большая серия TGCT с амплификациями12p, наименьшая зона перекрытия амплификаций (SHROA), осталасьв прежних пределах. Похоже, что точки разрывов ампликонов кластерируютсяв определенных местах, предполагая вовлеченность многих геновв этот процесс. К настоящемку моменту в зоне SHROA картированытри гена: SOX5, JAW1 и KRAS2. Мы предполагаем, что наиболее вероятнымкандидатом является ген KRAS2 (Olie et al., 1995). Мутации KRAS2также не имеют прогностического значения.

Дальнейшие перспективы

Многие вопросы до сих про не решены. это касается раннего развитияи, в особенности, генов вовлеченных в процесс образования герминогенныхопухолей. Исследования семей с предрасположенностью к определенномкутипу рака представляется весьма многообещающим для выяснения молекулярныхмеханизмов. В случае TGCT генетическая предрасположенность выявленау 25-33% больных (Nicholson and Harland 1995). Поиск генов предрасположенностив опухолях этих больных показал. что наиболее вероятными местамиих локализации являются хромосомы 3, 5, 12 и 18 (Leahy et al.,1995). Несомненно, предположение о существовании генов предрасположенноститребует проведения более обширного семейного анализа. если окажется,что идентифицированные гены являются опухолевыми супрессорами,то результаты этих исследований должны быть сопоставлены с даннымиLOH-анализа (Murty et al., 1994- Peng et al., 1999).

Биологическое значение присутствия экстра копий генов 12p в развитииTGCT остается пока невыясненной. В этой связи интересными представляютсяисследования малого числа копий 12p в CIS, и их возможного увеличенияв процессе инвазивного роста. Окончательное решение этоой проблемыбудет достигнуто с развитием новых методов исследования in vitroи созданием подходящих животных моделей.

Литература.

Atkin, NB (1973). "High chromosome numbers of seminomataand malignant teratomata of the testis: a review of data on 103tumours." Britisch Journal of Cancer 28:275-279.

Atkin, NB, and MC Baker (1982). "Specific chromosome change,i(12p), in testicular tumours?" Lancet 8311:1340.

Blough, RI, NA Heerema, P Albers, and RS Foster (1998). "Fluorescencein situ hybridization on nuclei from paraffin-embedded tissuein low stage pure embryonal carcinoma of the testis." J Urol159:240-244.

Blough, RI, TA Smolarek, TM Ulbright, and NA Heerema (1997)."Bicolor fluorescence in situ hyrbridization on nuclei fromformalin-fixed, paraffin-embedded testicular germ cell tumors:comparison with standard metaphase analysis." Cancer GenetCytogenet 94:79-84.

Bokemeyer, C, and HJ Schmoll (1995). "Treatment of testicularcancer and the development of secondary malignancies." Journalof Clinical.Oncology 13:283-292.

Burke, AP, and FK Mostofi (1988). "Intratubular malignantgerm cells in testicular biopties: clinical course and identificationby staining for placental alkaline phosphatase." Modern Pathology1:475-479.

Burke, AP, and FK Mostofi (1993). "Spermatocytic seminoma.A clinicopathologic study of 79 cases." Journal of UrologicPathology 1:21-32.

Bussey, KJ, HJ Lawce, SB Olson, DC Arthur, DK Kalousek, M Krailo,R Giller, S Heifetz, R Womer, and RE Magenis (1999). "Chromosomeabnormalities of eighty-one pediatric germ cell tumors: sex- ,age-, site-, and histopathology-related differences--a Children`sCancer Group study." Genes Chromosom & Cancer 25:134-46.

Castedo, SM, B De Jong, JW Oosterhuis, R Seruca, VJ Idenburg,A Dam, G te Meerman, HS Koops, and DT Sleijfer (1989). "Chromosomalchanges in human primary testicular nonseminomatous germ celltumors." Cancer Res. 49:5696-5701.

Cummings, OW, TM Ulbright, JN Eble, and LM Roth (1994). "Spermatocyticseminoma: an immunohistochemical study." Hum Pathol 25:54-59.

De Jong, B, JW Oosterhuis, SMMJ Castedo, A Vos, and GJ Te Meerman(1990). "Pathogenesis of adult testicular germ cell tumors:A cytogenetic model." Cancer Genet Cytogenet 48:143-167.

Dekker, I, T Rozeboom, J Delemarre, A Dam, and JW Oosterhuis(1992). "Placental-like alkaline phosphatase and DNA flowcytometry in spermatocytic seminoma." Cancer 69:993-996.

Dieckmann, KP, and V Loy (1993). "Testicular intraepithelialneoplasia: The precursor of testicular germ cell tumors."Onkologie. 16:61-68.

Dmitrovsky, E, GJ Bosl, and RSK Chaganti (1990). "Clinicaland genetic features of human germ cell cancer." Cancer Surv.9:369-389.

Eble, JN (1994). "Spermatocytic seminoma." Hum Pathol25:1035-1042.

el-Naggar, AK, JY Ro, D McLemore, AG Ayala, and JG Batsakis (1992)."DNA ploidy in testicular germ cell neoplasms. Histogeneticand clinical implications." Am J Surg Pathol 16:611-8.

Fossa, SD, JM Nesland, EO Pettersen, O Amellem, H Waehre, andK Heimdal (1991). "DNA ploidy in primary testicular cancer."Br J Cancer 64:948-952.

Geurts van Kessel, A, E Van Drunen, B De Jong, JW Oosterhuis,A Langeveld, and MP Mulder (1989). "Chromosome 12q heterozygosityis retained in i(12p)-positive testicular germ cell tumor cells."Cancer Genet Cytogenet 40:129-134.

Giwercman, A, H Von der Maase, and NE Skakkeb?k (1993). "Epidemiologicaland clinical aspects of carcinoma in situ of the testis."European Urology 23:104-114.

Gondos, B (1993). "Ultrastructure of developing and malignantgerm cells." European Urology 23:68-75.

Gonzalez-Crussi, F (1982). Extragonadal teratomas. Washington,Armed Forces Institute of Pathology.

Guillou, L, A Estreicher, P Chaubert, J Hurlimann, AM Kurt, GMetthez, R Iggo, AC Gray, P Jichlinski, and J Benhattar (1996)."Germ cell tumors of the testis overexpress wild-type p53."Am J Pathol 149:1221-1228.

Haddad, FS, PM Sorini, AA Somsin, MH Nathan, RM Dobbs, CS Berger,and AA Sandberg (1988). "Familial double testicular tumors:identical chromosome changes in seminoma and embryonal carcinomaof the same testis." J Urol 139:748-50.

Harms, D, and U Janig (1986). "Germ cell tumours of childhood.Report of 170 cases including 59 pure and partial yolk-sac tumours."Virchows Arch Pathol Anat 409:223-239.

Henderson, BE, L Bernstein, RK Ross, RH Depue, and HL Judd (1988)."The early in utero oestrogen and testosterone environmentof blacks and whites: potential effects on male offspring."Br J Cancer 57:216-8.

Haupt, Y, R Maya, A Kazaz, and M Oren (1997). "Mdm2 promotesthe rapid degradation of p53." Nature 387:296-9.

Hoffner, L, R Deka, A Chakravarti, and U Surti (1994). "Cytogeneticsand origins of pediatric germ cell tumors." Cancer GenetCytogenet 74:54-58.

Houldsworth, J, V Reuter, GJ Bosl, and RS Chaganti (1997). "Aberrantexpression of cyclin D2 is an early event in human male germ celltumorigenesis." Cell Growth Differ 8:293-9.

Houldsworth, J, V Reuter, GJ Bosl, and RSK Chaganti (1997). "Aberrantexpression of cyclin D2 is an early event in human male germ celltumorigenesis." Cell Growth & Developm 8:293-299.

Jacobsen, GK (1992). "A fetal testis with intratubular germcell neoplasia (ITGCN)." Modern Pathology 5:547-549.

Jorgensen, N, A Giwercman, J Muller, and NE Skakkeb?k (1993)."Immunohistochemical markers of carcinoma in situ of thetestis also expressed in normal infantile germ cells." Histopathol22:373-378.

Jenderny, J, E Koester, A Meyer, O Borchers, W Grote, D Harms,and U Jaenig (1995). "Detection of chromosome aberrationsin paraffin sections of seven gonadal yolk sac tumors of childhood."Hum Genet 96:644-650.

Jenderny, J, E Koester, O Borchers, A Meyer, W Grote, D Harms,and U Jaenig (1996). "Interphase cytogenetics on paraffinsections of paediatric extragonadal yolk sac tumours." VirchArch Int J Pathol 428:53-57.

Kaplan, CG, FB Askin, and K Benirschke (1979). "Cytogeneticsof extragonadal tumors." Teratology 19:261-266.

Kommoss, F, M Bibbo, and A Talerman (1990). "Nuclear deoxyribonucleicacid content (ploidy) of endodermal sinus (yolk sac) tumor."Lab Invest. 62:223-231.

Korn, MW, DEM Olde Weghuis, RF Suijkerbuijk, U Schmidt, T Otto,S Du Manoir, A Geurts van Kessel, S Seeber, and R Becher (1996)."Detection of chromosomal DNA gains and losses in testiculargerm cell tumors by comparative genomic hybridization." GenesChromosom & Cancer 17:78-87.

Kraggerud, SM, A Berner, M Bryne, EO Pettersen, and SD Fossa(1999). "Spermatocytic seminoma as compared to classicalseminoma: an immunohistochemical and DNA flow cytometric study."Apmis 107:297-302.

Lane, DP, and PA Hall (1997). "MDM2--arbiter of p53`s destruction."Trends Biochem Sci 22:372-4.

Leahy, MG, S Tonks, JH Moses, AR Brett, R Huddart, D Forman,RTD Oliver, DT Bishop, and JG Bodmer (1995). "Candidate regionsfor a testicular cancer susceptibility gene." Hum Mol Genet4:1551-1555.

Looijenga, LHJ, RA Olie, I Van der Gaag, FJ van Sluijs, J Matoska,J Ploem-Zaaijer, C Knepfle, and JW Oosterhuis (1994). "Seminomasof the canine testis- counterpart of spermatocytic seminoma ofmen?" Lab Invest 71:490-496.

Looijenga, LHJ, Oosterhuis J.W. (1999). "Pathogenesis oftesticular germ cell tumors." Rev of Reproduction 4:90-100.

Lothe, RA, P Peltomaeki, N Tommerup, SD Fossa, AE Stenwig, ALBorresen, and JM Nesland (1995). "Molecular genetic changesin human male germ cell tumors." Lab Invest 73:606-614.

Manivel, JC, J Jessurun, MR Wick, and LP Dehner (1987). "Placentalalkaline phosphatase immunoreactivity in testicular germ-cellneoplasms." Am J Surg Pathol 11(1):21-29.

Manova, K, and R Bachvarova (1991). "Expression of c-kitencoded at the W locus of mice in developing embryonic germ cellsand presumptive melanoblast." Developmental Biology 146:312-324.

Masson, P (1946). "Etude sur le seminome." Rev CancerBiol 5:361-387.

Mathew, S, VVVS Murty, GJ Bosl, and RSK Chaganti (1994). "Lossof heterozygosity identifies multiple sites of allelic deletionson chromosome 1 in human male germ cell tumors." Cancer Researchs54:6265-6269.

Mostofi FK, Sesterhenn IA, Sobin LH. Histological typing of testistumours, second edition, Springer, Berlin, 1998.

Midgley, CA, and DP Lane (1997). "p53 protein stabilityin tumour cells is not determined by mutation but is dependenton Mdm2 binding." Oncogene 15:1179-89.

Mostert, MMC, M Van de Pol, D Olde Weghuis, RF Suijkerbuijk,A Geurts van Kessel, J Van Echten-Arends, JW Oosterhuis, and LHJLooijenga (1996). "Comparative genomic hybridization of germcell tumors of the adult testis- confirmation of karyotypic findingsand identification of a 12p-amplicon." Cancer Genet Cytogenet89:146-152.

Mukherjee, AB, VVVS Murty, E Rodriquez, VE Reuter, GJ Bosl, andRSK Chaganti (1991). "Detection and analysis of origin ofi(12p), a diagnostic marker of human male germ cell tumors byfluorescent in situ hybridization." Genes Chromosom Cancer3:300-307.

Muller, J, NE Skakkebaek, and MC Parkinson (1987). "Thespermatocytic seminoma: views on pathogenesis." Int J Androl10:147-56.

Murty, VVVS, GJ Bosl, J Houldsworth, M Meyers, AB Mukherjee,V Reuter, and RSK Chaganti (1994). "Allelic loss and somaticdifferentiation in human male germ cell tumors." Oncogene9:2245-2251.

Murty, VVVS, and RSK Chaganti (1998). "A genetic perspectiveof male germ cell tumors." Semin Oncol 25:133-144.

Murty, VVVS, J Houldsworth, S Baldwin, V Reuter, W Hunziker,P Besmer, G Bosl, and RSK Chaganti (1992). "Allelic deletionsin the long arm of chromosome 12 identify sites of candidate tumorsuppressor genes in male germ cell tumors." Proc Natl AcadSci USA 89:11006-11010.

Murty, VVVS, RG Li, J Houldsworth, DL Bronson, VE Reuter, GJBosl, and RSK Chaganti (1994). "Frequent allelic deletionsand loss of expression characterize the DCC gene in male germcell tumors." Oncogene 9:3227-3231.

Murty, VVVS, RG Li, S Mathew, VE Reuter, DL Bronson, GJ Bosl,and RSK Chaganti (1994). "Replication error-type geneticinstability at 1q42-43 in human male germ cell tumors." CancerResearchs 54:3983-3985.

Nicholson, PW, and SJ Harland (1995). "Inheritance and testicularcancer." Britisch Journal of Cancer 71:421-426.

Nowell, PC (1976). "The clonal evolution of tumor cell populations."Science 194:23-28.

Nowell, PC (1986). "Mechanisms of tumor progression."Cancer Res. 46:2203-2207.

Olie, RA, AWM Boersman, MC Dekker, K Nooter, LHJ Looijenga, andJW Oosterhuis (1996). "Apoptosis of human seminoma cellsupon disruption of their micro-environment." Brit J Cancer73:1031-1036.

Olie, RA, LHJ Looijenga, L Boerrigter, B Top, S Rodenhuis, MPMulder, and JW Oosterhuis (1995). "N- and KRAS mutationsin human testicular germ cell tumors: incidence and possible biologicalimplications." Genes Chromosom & Cancer 12:110-116.

Oliver, RTD (1987). "HLA phenotype and clinicopathologicalbehaviour of germ cell tumours: possible evidence for clonal evolutionfrom seminomas to nonseminomas." Int J Androl 10:85-93.

Oosterhuis, JW, SM Castedo, B de Jong, CJ Cornelisse, A Dam,DT Sleijfer, and H Schraffordt Koops (1989). "Ploidy of primarygerm cell tumors of the testis. Pathogenetic and clinical relevance."Lab Invest 60:14-21.

Oosterhuis, JW, SMMJ Castedo, B De Jong, CJ Cornelisse, A Dam,DT Sleijfer, and H Schraffordt Koops (1989). "Ploidy of primarygerm cell tumors of the testis. Pathogenetic and clinical relevance."Lab Invest 60:14-20.

Oosterhuis, JW, SMMJ Castedo, B De Jong, R Seruca, J Buist, HSchraffordt Koops, and JB Leeuw (1988). "Karyotyping andDNA flow cytometry of an orchidoblastoma." Cancer Genet Cytogenet36:7-11.

Oosterhuis, JW, B De Jong, E Dmitrovsky, and LHJ Looijenga (1997).Testicular Germ Cell Tumors. Molecular Biology and Genetics. Principlesand Practice of Genitourinary Oncology. D. Raghavan, H. I. Scher,S. A. Leibel and P. Lange. Philadelphia, Lippincott-Raven Publishers:631-642.

Oosterhuis, JW, RJ Van Berlo, B De Jong, A Dam, J Buist, RYJTamminga, and RP Zwierstra (1993). "Sacral teratoma withlate recurrence of yolk sac tumor: human counterpart of embryo-or yolk sac-derived teratoma?" J Urol Pathol 1:257-267.

Ottesen, AM, M Kirchhoff, E Rajpert De-Meyts, J Maahr, T Gerdes,H Rose, C Lundsteen, P Meidahl Petersen, J Philip, and NE Skakkeb?k(1997). "Detection of chromosomal aberrations in seminomatousgerm cell tumours using comparative genomic hybridization."Genes Chromosom & Cancer 20:412-418.

Parkinson, MC, and P Ramani (1993). "Intratubular germ cellneoplasia in an infantile testis." Histopathology 23:99.

Peng, HQ, L Liu, PE Goss, D Bailey, and D Hogg (1999). "Chromosomaldeletions occur in restricted regions of 5q in testicular germcell cancer." Oncogene 18:3277-83.

Perlman, EJ, B Cushing, E Hawkins, and CA Griffin (1994). "Cytogeneticanalysis of childhood endodermal sinus tumors: a Pediatric OncologyGroup study." Pediatr Pathol 14:695-708.

Perlman, EJ, MB Valentine, CA Griffin, and AT Look (1996). "Deletionof 1p36 in childhood endodermal sinus tumors by two-color fluoresencein situ hybridization: a pediatric oncology group study."Genes Chromosom & Cancer 16:15-20.

Prives, C (1998). "Signaling to p53: breaking the MDM2-p53circuit." Cell 95:5-8.

Rajpert-De Meyts, E, and NE Skakkeb?k (1994). "Expressionof the c-kit protein product in carcinoma-in-situ and invasivetesticular germ cell tumours." Int J Androl 17:85-92.

Rodriquez, E, S Mathew, AB Mukherjee, VE Reuter, GJ Bosl, andRSK Chaganti (1992). "Analysis of chromosome 12 aneuploidyin interphase cells from male germ cell tumors by fluorescencein situ hybridization." Genes Chromosom Cancer 5:21-29.

Romanenko, AM, and YV Persidskii (1983). "Ultrastructureand histogenesis of spermatocytic seminoma." Voprosi Onkologii19:61-66.

Rosai, J, K Khodadoust, and I Silber (1969). "Spermatocyticseminoma." Cancer 24:103-116.

Rosenberg, C, T Bakker Schut, MC Mostert, HJ Tanke, AK Raap,JW Oosterhuis, and LHJ Looijenga (1999). "Chromosomal gainsand losses in testicular germ cell tumors of adolescents and adultsinvestigated by a modified CGH approach." Lab Invest 79:1447-1451.

Rosenberg, C, MC Mostert, T Bakker Schut, M Van de Pol, J VanEchten-Arends, B De Jong, T Raap, H Tanke, JW Oosterhuis, andLHJ Looijenga (1998). "Chromosomal constitution of humanspermatocytic seminomas: comparative genomic hybridization supporedby conventional and interphase cytogenetics." Genes Chromosom& Cancer 23:286-291.

Samaniego, F, E Rodriguez, J Houldsworth, VV Murty, M Ladanyi,KP Lele, QG Chen, E Dmitrovsky, NL Geller, V Reuter, and et al.,(1990). "Cytogenetic and molecular analysis of human malegerm cell tumors: chromosome 12 abnormalities and gene amplification."Genes Chromosom Cancer 1:289-300.

Schenkman, NS, IA Sesterhenn, L Washington, YA Tong, CM Weghorst,GS Buzard, S Srivastava, and JW Moul (1995). "Increased p53protein does not correlate to p53 gene mutations in microdissectedhuman testicular germ cell tumors." J Urol 154:617-621.

Schmidt, B, R Ackermann, M Hartmann, and T Strohmeyer (1997)."Alterations of the metastasis suppressor gene nm23 and theproto-oncogene c-myc in human testicular germ cell tumors."J Urol 158:2000-2005.

Scully, RE (1979). Atlas of tumor Pathology. Washington, DC,Armed Forces Institute of Pathology.

Sesterhenn, IA (1985). The role of intratubular malignant germcells in the histogenesis of germ cell tumors. Proceedings ofthe 2nd germ cell tumor conference. W. G. Jones, A. Milford Wardand C. K. Anderson. Leeds: 25-35.

Shimogaki, H, S Kitazawa, S Maeda, and S Kamidono (1993). "Variableexpression of hst-1, int-1, and parathyroid hormone-related proteinin different histolofical types of human testicular germ celltumors." Cancer Journal 6(2):81-86.

Shuin, T, H Misaki, Y Kuboto, M Yao, and M Hosaka (1994). "Differentialexpression of protooncogenes in human germ cell tumors of thetestis." Cancer 73:1721-1727.

Siebert, R, and K Weber-Matthiesen (1997). "Fluorescencein situ hybridization as a diagnostic tool in malignant lymphomas."Histochem Cell Biol 108:391-402.

Silver, SA, JM Wiley, and EJ Perlman (1994). "DNA ploidyanalysis of pediatric germ cell tumors." Mod Pathol 7:951-956.

Sinke, RJ, RF Suijkerbuijk, B De Jong, JW Oosterhuis, and A Geurtsvan Kessel (1993). "Uniparental origin of i(12p) in humangerm cell tumors." Genes Chromosom Cancer 6:161-165.

Skakkebaek, NE, JG Berthelsen, A Giwercman, and J Muller (1987)."Carcinoma-in-situ of the testis: possible origin from gonocytesand precursor of all types of germ cell tumours except spermatocytoma."Int J Androl 10:19-28.

Stock, C, IM Ambros, T Lion, OA Haas, A Zoubek, H Gadner, andPF Ambros (1994). "Detection of numerical and structuralchromosome abnormalities in pediatric germ cell tumors by meansof interphase cytogenetics." Genes Chromosom & Cancer11:40-50.

Stock, C, IM Ambros, S Sthehl, A Zubek, FM Fink, H Gadner, andPF Ambros (1995). "Cytogenetic aspects of pediatric germcell tumors." Klin Padiatr 207:235-241.

Strohmeyer, T, D Reese, M Press, R Ackermann, M Hartmann, andD Slamon (1995). "Expression of the c-kit proto-oncogeneand its ligand stem cell factor (SCF) in normal and malignanthuman testicular tissue." Journal of Urology 153:511-515.

Strohmeyer, T, S Peter, M Hartmann, S Munemitsu, R Ackermann,A Ullrich, and DJ Slamon (1991). "Expression of the hst-1and c-kit protooncogenes in human testicular germ cell tumors."Cancer Research 51:1811-1816.

Suijkerbuijk, RF, RJ Sinke, AM Meloni, JM Parrington, J van Echten,B De Jong, JW Oosterhuis, AA Sandberg, and A Geurts van Kessel(1993). "Overrepresentation of chromosome 12p sequences andkaryotypic evolution in i(12p)-negative testicular germ-cell tumorsrevealed by fluorescence in situ hybridization." Cancer GenetCytogenet 70:85-93.

Suijkerbuijk, RF, RJ Sinke, DEM Olde Weghuis, L Roque, A Forus,F Stellink, A Siepman, C Van de Kaa, J Soares, and A Geurts vanKessel (1994). "Amplification of chromosome subregion 12p11.2-p12.1in a metastatis of an i(12p)-negative seminoma: relationship totumor progression?" Cancer Genet Cytogenet 78:145-152.

Summersgill, B, H Goker, S Wber-Hall, R Huddart, A Horwich, andJ Shipley (1998). "Molecular cytogenetic analysis of adulttesticular germ cell tumours and identification of regions ofconsensus copy number change." Brit J Cancer 77:305-313.

Takahashi, H (1993). "Cytometric analysis of testicularseminoma and spermatocytic seminoma." Acta Pathol Japon 43:121-129.

Talerman, A (1980). "Spermatocytic seminoma." Cancer45:2169-2176.

Talerman, A, YS Fu, and T Okagaki (1984). "Spermatocyticseminoma. Ultrastructural and microspectrophotometric observations."Lab Invest 51(3):343-349.

Van Berlo, RJ, JW Oosterhuis, E Schrijnemakers, CJF Schoots,B De Jong, and I Damjanov (1990). "Yolk-sac carcinoma developsspontaneously as a late occurrence in slow-growing teratoid tumorsproduced from transplanted 7-day mouse embryos." InternationalJournal of Cancer 45:153-155.

Van Echten-Arends, J, JW Oosterhuis, LHJ Looijenga, A Dam, DTSleijfer, H Schraffordt Koops, and B De Jong (1995). "Cytogeneticevidence that the seminoma and nonseminoma component of mixedtesticular germ cell tumors may either be monoclonal or polyclonalin origin: report of 3 cases." Modern Pathology in press.

Van Echten-Arends, J, JW Oosterhuis, LHJ Looijenga, J Wiersma,G te Meerman, H Schraffordt Koops, DT Sleijfer, and B De Jong(1995). "No recurrent structural abnormalities in germ celltumors of the adult testis apart from i(12p)." Genes Chromosom& Cancer 14:133-144.

Yoshida, T, M Tsutsumi, H Sakamoto, K Miyagawa, S Teshima, TSugimura, and M Terada (1988). "Expression of the HST1 oncogenein human germ cell tumors." Biochem Biophys Res Commun 155:1324-1329.