Пролиферация мононуклеарных лейкоцитов. Влияние иммуномодуляторов на лейкоциты

В следующей серии экспериментов сравнивалось влияние иммуномодуляторов на спонтанную и стимулированную ФГА, пролиферативную активность МЛПК здоровых доноров.
Данные демонстрируют стимулирующий эффект иммуномодуляторов на пролиферативный потенциал МЛПК. При использовании АСО процент властных форм нарастает от 18,4 до 42,0 и максимальный индекс стимуляции при этом составляет 10,0. Стимулирование ФГА обусловило увеличение этих показателей (34,8 и 61,3), соответственно. Индекс стимуляции составил при большей дозе 14,6. Во всех случаях показатели без ФГА и с ФГА существенно отличаются.

Эта же закономерность прослеживается при введении в среду Иммуновак-ВП-4 и ГМДП. Выявлено четкое возрастание индекса стимуляции при увеличении концентрации ИММП и добавлении ФГА. Сравнение средних концентраций иммуномодуляторов показывает, что собственное влияние Иммуновак-ВП-4 (1 мкг/мл) на пролиферативную активность выше влияния АСО (0,15 ЕС/мл) в 1,9 раза, а ГМДП (1 мкг/мл) в 1,4 раза.

Результаты этого исследования были подтверждены в следующем эксперименте при использовании другого методического подхода — теста восстановления витального красителя Alamar Blue (Biosours, USA). Проведенные эксперименты показали, что, как и в предыдущем случае, активность ВП-4 и ГМДП была выше по сравнению с АСО и контрольными группами.

Цитотоксический эффект NK воспроизводится in vitro, и это свойство лимфоцитов используют для оценки их киллерной активности. В отличие от цитотоксических специфических лимфоцитов естественные киллеры распознают свои мишени без участия главного комплекса гистосовместимости I и II классов.

Одним из методов оценки противоопухолевой активности иммуномодулирующих препаратов является определение спонтанной и стимулированной митогенами цитотоксичности мононуклеарных лейкоцитов периферической крови (МЛПК) in vitro. С этой целью применяют митогены растительного (пектины) и бактериального происхождения (ЛПС), являющиеся наиболее сильными неспецифическими активаторами клеток иммунной системы.

Их использование в качестве референс-препаратов дает возможность оценить степень влияния различных ИММП на активность МЛПК по способности разрушать опухолевые клетки-мишени in vitro.

В настоящем исследовании стимулирующий эффект бактериальной вакцины ВП-4 на цитотоксическую активность МЛПК сравнивали с действием неспецифических поликлональных активаторов: Т-клеточного митогена — ФГА и В-клеточных митогенов — ЛПС К. pneumoniae и E. coli. В предварительных исследованиях было установлено отсутствие прямого цитотоксического действия препаратов на опухолевые клетки в диапазоне воздействующих концентраций от 0,1 до 10,0 мкг/мл.

Для изучения модулирующей активности митогенов и вакцины на цитотоксический эффект МЛПК по отношению к клеткам рака толстой кишки человека Colo использовали различные соотношения МЛПК и опухолевых клеток, а также доз препаратов. Уменьшение соотношения опухолевые клетки/МЛПКс 1:5 до 1:2,5 и 1:1 приводило к снижению спонтанной цитотоксичности в отношении опухолевых клеток (с 38,0±1,0% до 32,6±0,9% и 20,9±0,3% соответственно).

Значения цитотоксической активности мононуклеаров в присутствии ФГА, ЛПС и ВП-4 в среде культивирования достигали максимальных значений при соотношении клеток 1:5 и концентрации препаратов 10 мкг/мл.

Источник: http://meduniver.com