Влияние иммуномодуляторов на цитокины. Продукция цитокинов спленоцитами после стимуляции

Важнейшую роль в межклеточных взаимодействиях на уровне врожденного иммунитета, регуляции иммунной дифференцировки Т-лимфоцитов и определении направления развития иммунных процессов играют цитокины.
Исследование динамики продукции цитокинов в процессе вакцинации позволяет на клеточно-молекулярном уровне определить механизм действия препарата и возможность его рационального применения.

Изучение уровня цитокинов было проведено на мышах линии СВА, которых вакцинировали Иммуновак-ВП-4 однократно внутрибрюшинно в дозе 400 мкг. Цитокины определяли с помощью твердофазного иммуноферментного метода (ELISA) в сыворотке крови мышей и культуре спленоцитов в различные периоды времени после вакцинации, а также без добавок (спонтанная индукция). При спонтанной продукции в культуральной среде в различные интервалы времени после иммунизации определяли повышение содержания следующих цитокинов: IL-1P, IL-6, IL-10, IL-12, INF-y. Обращает на себя внимание то, что изменение уровня цитокинов происходит уже через 0,5-1 час после вакцинации. При спонтанной индукции цитокинов спленоцитами увеличивалось содержание провоспалительных интерлейкинов: IL-1B и IL-6, регуляторных IL-12 и IFN-y, наиболее высокие уровни концентраций которых отмечены в течение первых четырех часов.

При коинкубации спленоцитов животных с Иммуновак-ВП-4 или ФГА выявлено снижение уровня продукции IFN-y, IL-10, повышение IL-1(3, IL-12 и сохранение высоких концентраций IL-12 в течение более длительного времени, по сравнению со спонтанной продукцией этих цитокинов спленоцитами вакцинированных мышей.

Эти эксперименты показали, что введение ВП-4 вызывает значительное увеличение спектра цитокинов, определяемое как в сыворотке крови, так и в культурах спленоцитов вакцинированных мышей, что способствует развитию иммунного ответа и дифференцировке Т-лимфоцитов по Th1-типу. Об этом же свидетельствует и то, что в течение всего времени наблюдения не выявлено увеличение содержания IL-4, являющегося медиатором дифференцировки Т-лимфоцитов по Тh2 типу.

Продукция цитокинов спленоцитами после стимуляции

Изучение спектра и уровня цитокинов было проведено также в сыворотке крови мышей, вакцинированных различными дозами АСО.
Введение мышам 15- 1,5- 0,15 единиц связывания (ЕС) анатоксина приводило к увеличению в сыворотках мышей содержания цитокинов IL-1B и IL-12 по сравнению с их уровнем до иммунизации. Однако концентрации этих цитокинов были не столь высоки (< 70 пкг/мл), как при введении ВП-4.

Уровень цитокинов в сыворотке не имел существенных различий при иммунизации мышей указанными дозами АСО.
Далее была изучена продукция цитокинов клетками селезенки у мышей линии СВА в культуре Спленоциты (2 х106 кл/мл) инкубировали в культуральной среде в течение 48 часов при добавлении АСО (0,15 ЕС/мл) или ФГА (10 мкг/мл), а также без добавок (спонтанная индукция).

При спонтанной индукции отмечали значимое повышение содержания в культуре спленоцитов IL-1b, IL-6, IL-10, причем IL-6 и IL-10 увеличивались в большей степени при введении меньшей дозы АСО. Существенной динамики IL-12 и IFN-y не было отмечено. В культуральной среде при стимуляции спленоцитов ФГА определяли более высокое содержание IL-10 и появление значимых количеств IL-ip, IL-4, IL-2, TNF-a и IFN-y.

IL-2 при стимуляции спленоцитов ФГА повышался при иммунизации мышей АСО дозами 15-0,15 ЕС/мышь в 1,3-1,8 раза. Уровень IL-4 увеличивался практически при всех используемых дозах анатоксина в культуре спленоцитов, стимулированных ФГА.

При внесении в культуру спленоцитов мышей, иммунизированных АСО, вместо ФГА ex vivo АСО выявлено преимущественное повышение уровня IL-10, снижение уровня IL-4, INF-y и отсутствие динамики IL-12.
Полученные результаты позволяют предположить, что анатоксин инициирует Th1- и ТЬ2-пути иммунного ответа, поскольку продуцентами IL-4 являются Тп2-лимфоциты, а IL-12 поляризует иммунный ответ по Тр1 пути.

Спленоциты иммунизированных Иммуновак-ВП-4 и АСО мышей обладают способностью к спонтанному синтезу широкого спектра цитокинов и последующая стимуляция спленоцитов ФГА или одноименными иммуномодуляторами приводит к снижению IFN-y и IL-10 при действии Иммуновак-ВП-4, IFN-y и IL-4 при действии АСО.

Источник: http://meduniver.com