Цитотоксичность естественных киллеров. Влияние иммуномодуляторов на nk-клетки

При уменьшении содержания мононуклеарных лейкоцитов периферической крови (МЛПК) цитотоксическая активность прогрессивно снижалась даже при использовании наибольшей из испытанных доз препаратов. При разведении МЛПК (1:1) достоверной стимулирующей активностью во всем диапазоне испытанных доз обладал ФГА, бактериальная вакцина в дозах 10,0 и 1,0 мкг/мл, а ЛПС эффективнее оказался только в дозе 10 мкг/мл. Эти данные свидетельствуют об отсутствии прямого цитотоксического действия препаратов на клетки-мишени и подтверждают их способность стимулировать цитотоксический эффект МЛПК. Наименьшей цитотоксической активностью обладали МЛПК, стимулированные В-клеточными митогенами — бактериальными ЛПС. При этом активность использованных ЛПС не имела различий.

По сравнению с ЛПС Иммуновак-ВП-4, содержащий в своем составе не только ЛПС, но и другие активные антигенные компоненты микробных клеток, в большей степени стимулировал цитотоксическую активность МЛПК при всех дозах и разных соотношениях опухолевых клеток и эффекторов.

Эти данные полностью подтвердились при исследовании способности тех же препаратов индуцировать NK-активность МЛПК в отношении чувствительной к действию естественных киллеров клеток опухолевой линии К562. На основании предыдущих исследований было выбрано наиболее эффективное соотношение клетки-мишени/клетки эффекторы (1:5). При этом наблюдали дозозависимый эффект Иммуновак-ВП-4, ФГА и ЛПС на цитотоксичность МЛПК.

Доза, не оказывающая существенного стимулирующего влияния на цитотоксическую активность МЛПК, для всех препаратов составляла 0,01 мкг/мл. Проведенное исследование показало преимущество Иммуновак-ВП-4 по сравнению с ФГА, ЛПС К. pneumoniae и E. coli в диапазоне доз от 10,0 до 1,0 мкг/мл.

Сравнительный анализ показал, что МЛПК доноров, стимулированные IL-2 (1000 МЕ/мл) и Иммуновак-ВП-4 (10 мкг/мл), практически в равной степени оказывают выраженное цитотоксическое действие по отношению к линии опухолевых клеток эритробластного лейкоза (К562) и химиорезистентной линии немелкоклеточного рака легкого человека (А549), при этом цитотоксическое действие активированных МЛПК по отношению к нормальным эмбриональным клеткам легкого теленка (ЛЭК) отсутствовало. Это свидетельствует об избирательном опосредованном действии IL-2 и Иммуновак-ВП-4 (через МЛПК) в отношении трансформированных и нормальных клеток.

Аналогичное исследование было проведено при сравнительном изучении влияния АСО, ГМДП и Иммуновак-ВП-4 на цитотоксическую активность МЛПК здоровых доноров по отношению к клеткам-мишеням К562.

При испытании влияния ИММП на цитотоксическую активность МЛПК по отношению к линии эритробластного лейкоза человека К562 лимфоидные клетки отмывали от содержащихся в культуральной среде ИММП, что исключало их прямое цитотоксическое действие на опухолевые клетки. Все ИММП вызывали усиление цитотоксической активности, при этом, как и в предыдущих исследованиях, со снижением количества эффекторов, снижалась и киллерная активность МЛПК. Цитотоксическая активность МЛПК при действии Иммуновак-ВП-4 оказалась выше, чем при действии АСО при соотношении мишени/эффекторы 1:5 и 1:10. При уменьшении количества эффекторов цитотоксичность МЛПК при воздействии иммуномодуляторов снижалась, но при этом ее уровень был значительно выше, чем в контроле.
Оценка цитотоксического индекса МЛПК показала, что при соотношении мишени/эффекторы 1:5 и 1:10, цитотоксический индекс выше при действии Иммуновак-ВП-4 и ГМДП на МЛПК, чем при действии АСО.

Была также оценена цитотоксическая активность мононуклеарных лейкоцитов (МЛ) селезенки мышей линии СВА после однократной иммунизации АСО (1,5 ЕС), Иммуновак-ВП-4 (200 мкг) и ГМДП (100 мкг) по отношению к клеткам NK-чувствительной мышиной лимфомы YAC-1.

Данные свидетельствуют о том, что все исследуемые иммуномодуляторы микробного происхождения (ИММП) вызывали усиление цитотоксической активности МЛ селезенки мышей после их иммунизации по сравнению с неиммунизированными мышами. ГМДП и Иммуновак-ВП-4 в данной серии экспериментов были более активными, поскольку цитотоксический индекс, показывающий отношение цитотоксичности МЛ иммунизированных мышей к цитотоксической активности в контрольной группе животных, повышался до 4,5 при иммунизации Иммуновак-ВП-4 и до 4,7 — при введении ГМДП. АСО повышал данный показатель до 3,7.

Оценка пролиферативного потенциала мононуклеарных лейкоцитов периферической крови человека показала, что Иммуновак-ВП-4, так же как и референс-препараты: ФГА, ЛПС К. pneumoniae и Е. coli вызывали дозозависимое увеличение количества властных форм в популяции МЛ. При этом активность Иммуновак-ВП-4 во всех исследуемых концентрациях была выше исследованных ЛПС и сопоставима с действием ФГА Сравнительный анализ пролиферативной активности лимфоцитов под воздействием различных концентраций ИММП (Иммуновак-ВП-4, ГМДП и АСО) выявил максимальный стимулирующий эффект у Иммуновак-ВП-4, а наименьший у АСО.

Все исследованные препараты усиливали цитотоксическую активность МЛПК по отношению к опухолевым клеткам колоректального рака (Colo) и NK-чувствительной линии К562. Аналогичная картина наблюдалась в отношении цитотоксического потенциала МЛ иммунизированных мышей, исследованными препаратами. Стимулирующая активность АСО на цитотоксический потенциал NK уступала действию ГМДП и Иммуновак-ВП-4. Возможно, стимулирующий эффект иммуномодуляторов микробного происхождения обусловлен наличием различных PAMPs в их составе и связан со способностью воздействовать через рецепторный аппарат МЛ.

Источник: http://meduniver.com