Антигенпрезентирующая функция дендритных клеток под действием иммуномодуляторов. Влияние иммуномодуляторов на лимфоциты

Заключительным этапом функции дендритных клеток в рамках врожденного иммунитета является представление антигена и определение направленности T-клеточного иммунного ответа. Поэтому были проведены эксперименты по изучению действия ИММП на антигенпредставляющую функцию ДК и на их способность представлять антиген наивным Т-лимфоцитам.

В частности была изучена способность дендритных клеток, сформировавшихся под воздействием ИММП, стимулировать пролиферацию сингенных лимфоцитов мышей линии СВА. Для этого МЛ селезенки мышей (106 клеток) коинкубировали в течение 6 суток с ДК (5 х 104), полученными из клеток костного мозга, под воздействием ИММП. В качестве референс-препаратов использовали ЛПС К. pneumoniae и TNF-u.

Оценку пролиферативной активности МЛ, стимулированных дендритными клетками, проводили в колориметрическом тесте с использованием витального красителя AlamarBlue (Biosours, США). Рассчитывали индекс стимуляции, характеризующий отношение пролиферативной активности МЛ при стимуляции зрелыми ДК, к пролиферативной активности МЛ при стимуляции незрелыми ДК.

Сформировавшиеся под влиянием ИММП, зрелые дендритные клетки стимулировали пролиферативную активность мононуклеарных лейкоцитов мышей. Активность этих клеток была сопоставимой с активностью ДК, созревших после взаимодействия с ЛПС или TNF-a, за исключением ДК, стимулированных АСО. В данном случае пролиферация лимфоцитов была ниже по сравнению с другими индукторами созревания ДК, но выше по сравнению с незрелыми ДК. Это, возможно, было связано с формированием пула макрофагов, которые уступают активности зрелых ДК. При этом индекс стимуляции составил 1,4, во всех других случаях индекс стимуляции был в пределах 2-2,3.

В следующих экспериментах изучали антигенпредставляющую функцию дендритных клеток, полученных из клеток костного мозга мышей, сформировавшихся под воздействием ИММП Способность ДК представлять антиген Т-лимфоцитам оценивали по изменению цитотоксической активности лимфоцитов при культивировании их в присутствии ДК.

Для этого незрелые дендритные клетки нагружали лизатом различных опухолевых клеток и инкубировали с иммуномодуляторами в течение 16 часов. Затем ДК отмывали и инкубировали с лимфоцитами сингенных мышей в соотношении 1:20 в течение 6 суток в среде RPMI-1640. Контролем служили ДК, не обработанные лизатом опухолевых клеток. Далее отмытые лимфоциты коинкубировали с культурой исследуемых опухолевых линий в соотношении 5:1 в течение 24 часов.

Затем оценивали цитотоксичность лимфоцитов на линиях опухолевых клеток мышиной лимфомы YAC-1, Эрлиха, L929, К 562 в тесте восстановления 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида (МТТ-тест). На первом этапе определяли способность ДК презентировать антиген под воздействием Иммуновак-ВП-4, контролем служили ДК, обработанные TNF-a.

Цитотоксичность лимфоцитов в отношении испытанных опухолевых линий колебалась в пределах 33,9-43,9%, прибавление незрелых ДК не приводило к значимому увеличению этого показателя. ДК, созревшие вод влиянием вакцины ВП-4, обладали способностью предъявлять антиген наивным Т-лимфоцитам, что приводило к формированию цитотоксических эффекторов, которые являются элементом специфического адаптивного иммунитета.

Действительно, после контакта in vitro Т-лимфоцитов с созревшими под влиянием разных индукторов дендритных клеток, которые были нагружены антигенами исследуемых перевиваемых линий опухолевых клеток, Т-лимфоциты приобретали способность лизировать гомологичные для предъявленного антигена клетки-мишени. ДК, активированные Иммуновак-ВП-4 и нагруженные опухолевыми антигенами, обеспечивали в гомологичной системе увеличение цито-токсичности до 83,5-79,3%. ДК, активированные TNF-a и нагруженные опухолевыми антигенами, в гомологичной системе обеспечили такую же степень цитотоксичности 89,1-72,5%. В то же время в отношении других опухолевых клеток, антигенами которых ДК не были обработаны, цито-токсическая активность была ниже и колебалась в пределах 59,3-37,5% при активации Иммуновак-ВП-4 и 59,3-40,1% при TNF-a.

Источник: http://meduniver.com