Протромбиновое время смеси исследуемой плазмы с нормальной бедной тромбоцитами плазмой

Оценка времени коагуляции смеси нормальной и исследуемой БТП — это дополнительный лабораторный метод исследования пациентов, имеющих удлинение времени свертывания в ПТ, в котором врач получает информацию о недостаточности факторов свертывания или присутствии в исследуемой плазме ингибиторов коагуляции. Выполнение теста смешивания целесообразно лишь при неизвестной этиологии удлинения ПТ, поэтому при наличии информации о циррозе печени, лечении непрямыми антикоагулянтами и других уточненных нарушениях выполнение теста смешивания, как правило, не требуется.

Принцип метода

При недостаточности какого-либо коагуляционного фактора (I, II, V, VII, X) в тесте смешивания происходит нормализация ПВ за счет коррекции дефицита. Однако в том случае, когда удлинение ПТ обусловлено ингибирующим действием (ВА, гепарин или др.), нормализации ПВ не наблюдается, поскольку происходит угнетение коагуляции ингибиторами из исследуемого образца.

Реактивы и оборудование

• Тромбопластин-кальциевый реагент.
• Образец нормальной БТП.
• Коагулометр (при отсутствии коагулометра — водяная баня и секундомер).

Образцы крови для исследования

Для определения ПВ смеси используют образцы БТП больного и здорового.

Техника выполнения

В кювете коагулометра (или пробирке при мануальной технике выполнения) смешивают 0,05 мл исследуемой БТП, 0,05 мл нормальной плазмы, инкубируют эту смесь при температуре +37 °С в течение 2 мин. После инкубации в кювету добавляют 0,2 мл тромбопластин-кальциевого реагента, имеющего температуру +37 °С, и в тот же момент включают таймер коагулометра (или секундомер при мануальной технике выполнения) и регистрируют время свертывания. Коагулометр фиксирует время коагуляции автоматически, а при использовании мануальной техники определяют время появления сгустка, постоянно покачивая пробирку.

Оценка результатов исследования

ПВ смеси исследуемой плазмы и нормальной БТП учитывают в секундах. Тест смешивания служит важным дополнением при обнаружении дисфункции внешнего механизма свертывания. При наличии недостаточности коагуляционных факторов (I, II, V, VII, X) наблюдается коррекция времени свертывания, однако в тех случаях, когда удлинение ПТ обусловлено действием ингибиторов, коррекции времени свертывания не происходит.

Кроме исследования времени коагуляции смеси параллельно определяют ПВ нормальной БТП. В качестве нормальной БТП на рынке представлены специальные образцы, но также можно использовать и сливную нормальную плазму от 3-4 здоровых лиц при условии, что такие образцы не имеют нарушений ПВ.

Интерпретация результатов исследования Определение ПВ смеси традиционно используют для обнаружения ингибиторов волчаночного типа. Кроме того, в тесте смешивания не происходит полной коррекции при наличии в крови гепарина. Довольно часто при лечении непрямыми антикоагулянтами и при циррозе печени также не наблюдается полноценной коррекции времени свертывания.

Причины ошибок

• Неправильная дозировка цитрата при заборе венозной крови.
• Попадание в исследуемую кровь гепарина из венозного катетера.
• Гемолиз.
• Для выявления ингибиторов волчаночного типа в тестах смешивания лучше применять свежую нормальную БТП, поскольку высушенные образцы нормальной плазмы в таких случаях нередко дают ложную коррекцию удлинения времени свертывания.

Другие аналитические технологии

Большинство авторов, изучающих особенности ВА, используют равное соотношение смеси исследуемого образца и нормальной БТП (1:1), однако D.A. Kaczor et al. предлагают неравное соотношение объемов исследуемой и нормальной плазмы (4:1), что, по их мнению, более четко выявляет ингибиторы с низкой активностью.