Тромбиновый тест

Учет времени коагуляции после добавления в БТП тромбина позволяет получить информацию об эффективности превращения фибриногена в фибрин.

Принцип метода

Принцип метода основан на оценке скорости образования фибрина после добавления в БТП тромбина. Тромбин, отщепляя фибринопептиды А и В от молекулы фибриногена, образует фибрин, поэтому тест позволяет оценить потенциал конечного этапа коагуляции.

Реактивы и оборудование

• Тромбиновый реагент.
• Коагулометр (при отсутствии коагулометра — водяная баня и секундомер).

Образцы крови для исследования Для выполнения тромбинового теста используют БТП. Особенности подготовки образцов БТП детально рассмотрены в приложении 3.

Техника выполнения

В кювету коагулометра (или пробирку при мануальной технике выполнения) вносят 0,1 мл исследуемой плазмы и инкубируют ее. После инкубации в кювету добавляют 0,1 мл тромбинового реагента и в тот же момент включают таймер коагулометра (или секундомер при мануальной технике выполнения). Коагулометр фиксирует время коагуляции автоматически, а при мануальной технике использования регистрируют время появления сгустка, постоянно покачивая пробирку.

Оценка результатов исследования

Время свертывания учитывают в секундах. Поскольку время свертывания в норме зависит от активности тромбина, оценивают время свертывания не только исследуемой БТП, но и контрольной нормальной плазмы. В большинстве случаев причиной удлинения тромбинового теста является наличие в исследуемом образце гепарина, потому в таких ситуациях часто бывает достаточно использование тромбина, имеющего активность 14-17 с. При такой активности тромбина метод демонстрирует весьма низкую вариацию. Однако для выявления дисфибриногенемии и обнаружения действия ингибиторов конечного этапа коагуляции целесообразно использовать такую активность тромбина, которая бы обусловливала коагуляцию нормальной плазмы в диапазоне 25-35 с. В любом случае каждой лаборатории необходимо установить свой диапазон нормальных значений.

Интерпретация результатов исследования

Значительное удлинение в тромбиновом тесте, а зачастую и несвертываемость могут быть обусловлены гепарином. Кроме того, удлинение тромбинового времени (ТВ) наблюдается при гипо-, дис- и афибриногенемиях, на фоне применения прямых ингибиторов тромбина, а также у пациентов с высокой концентрацией ПДФ.

Иногда умеренное удлинение ТВ можно обнаружить при гепатитах. При циррозах, сопровождающихся выраженной гипофибриногенемией, нередко выявляется существенное удлинение ТВ.

Причины ошибок

• Несоблюдение температурного режима хранения реагентов.
• Наличие в исследуемой крови гепарина из венозного катетера.
• Гемолиз.
• Отсутствие или неэффективность системы внутреннего контроля качества.
• Использование нестабильного тромбина.

Другие аналитические технологии

Для оценки ТВ используют тромбин, выделенный из плазмы крупного рогатого скота или из плазмы человека. Существенных различий с точки зрения диагностики нарушений гемостаза между этими реагентами нет.

Близкими по технике выполнения и диагностическим задачам являются анцистроновый и батроксобиновый тесты.