Содержание альфафетопротеина (афп) в амниотической жидкости. Ацетилхолинэстераза и пренатальная диагностика дефектов нервной трубки.

Альфафетопротеин - АФП относится к категории онкоэмбриональных антигенов, т.е. белков, которые в норме присутствуют только в эмбриональных тканях, в то время как во взрослых тканях они выявляются лишь при наличии определенных типов опухолей. Содержание АФП в АЖ изменяется в разные сроки беременности. В небольших количествах АФП появляется уже на ранних стадиях, его концентрация быстро возрастает после 10 нед беременности, сохраняется на этом уровне вплоть до 17-й недели, постепенно снижается вследствие разведения АЖ мочой плода после 20 нед беременности. Так, максимальное содержание АФП (около 3000 мкг/мл) в сыворотке крови плода наблюдается между 10-й и 14-й неделей беременности, оно в сотни раз превышает уровень АФП в АЖ и в тысячи раз — в материнской сыворотке в исследуемый период. На 17-й неделе беременности содержание АФП в сыворотке крови плода приблизительно в 50 000 раз выше, чем в материнской сыворотке, и в 150 раз выше, чем в околоплодных водах.

До исследования диагностических образцов необходимо в каждом лабораторном центре получить свои медианы (нормы) содержания альфафетопротеина - АФП в АЖ для каждой недели беременности. Отклонения обычно выражают в единицах, кратных нормальному уровню для данного срока беременности (МоМ).

В лаборатории пренатальной диагностики Института акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН (Санкт-Петербург) с 1989 г. проводится исследование АЖ беременных группы высокого риска по рождению детей с дефектами нервной трубки и другими пороками развития.

Для иммуноферментного анализа содержания альфафетопротеина - АФП в АЖ используются стандартные наборы реактивов (например, тест-системы «Рош-Москва» или «Алкор-Био» (Санкт-Петербург)), при этом околоплодные воды необходимо разводить по крайней мере в 100 раз, так как содержание АФП в АЖ в норме составляет не менее 5 мкг/мл.

Повышение уровня альфафетопротеина - АФП в АЖ в несколько раз является серьезным признаком наличия дефектов нервной трубки, передней брюшной стенки или других аномалий, вследствие которых происходит истечение тканевой жидкости (сыворотки) плода в АЖ.

Ацетилхолинэстераза и пренатальная диагностика дефектов нервной трубки

Ацетилхолинэстераза (АХЭ) относится к классу эстераз, участвующих в гидролизе холиновых эфиров. Существуют два больших класса: бутирилхолинэстеразы (псевдохолинэстеразы) и истинные АХЭ. Главной трудностью в измерении АХЭ является дискриминация активностей двух ферментов, поэтому в ПД используется метод качественного исследования изо-ферментного состава, при котором в по-лиакриламидном геле в образцах АЖ плодов с анэнцефалией выявляется специфическая быстро двигающаяся полоса. В последнее время в печати снова появились сообщения о разработке тест-систем для количественного анализа АХЭ, однако в нашей стране они пока не производятся.

В 1989 г. в 17 центрах Великобритании было проведено совместное исследование образцов АЖ 32 642 беременных, 428 из которых имели плод с открытой спинномозговой грыжей, а 238 - с анэнцефалией. Специфичность АХЭ-теста оказалась выше, чем АФП, особенно при сроке беременности более 16 нед. Частота выявления пороков развития по наличию АХЭ составила 98% при 0,31% ложноположительных результатов, в то время как определение содержания АФП позволило выявить патологию в 91 % случаев (при 0,36% ложноположительных данных). Был сделан вывод о высокой информативности комплексного определения АФП и АХЭ во всех АЖ с повышенным содержанием АФП.

Согласно нашим наблюдениям во всех АЖ плодов с дефектами нервной трубки методом нативного электрофореза в полиакриламидном геле определяется наличие специфической изоформы АХЭ. Следует отметить, что проведение в Санкт-Петербурге двухуровневого ультразвукового обследования беременных позволяет в последние годы выявлять большинство грубых пороков развития, не прибегая к измерению АФП и АХЭ в АЖ.

Таким образом, биохимическое исследование АЖ для выявления дефектов нервной трубки или передней брюшной стенки проводится в случае резко повышенного уровня АФП в сыворотке крови (более 2,5 МоМ в 15—17 нед) и при отсутствии ультразвуковых данных о патологии плода.

Образцы АЖ получают при амниоцентезе путем аспирации 5—10 мл жидкости в сроки беременности от 16 до 26 нед. АЖ центрифугируют 20 мин при 2500 об./мин и либо непосредственно используют, либо хранят до исследования при температуре -20- 70° С. Содержание АФП в АЖ определяют методом ракетного иммуноэлектрофореза или иммуноферментным методом. Подробно с методикой определения АФП и АХЭ в АЖ можно ознакомиться в руководстве.

Источник: http://meduniver.com