Цитогенетический анализ клеток ворсин хориона плаценты.

Клетки ворсинчатого хориона (плаценты), доступные для цитогенетического анализа, имеют различное происхождение:
- клетки цитотрофобласта, дифференциация которого происходитна стадии морулы;
— клетки мезенхимы, которые дифференцируются из внутренней клеточной массы зародыша на стадии бластоцисты.

Видео: Цитогенетические методы исследования

Для хромосомного анализа по клеткам хориона или плаценты используют два основных метода.

1. Длительное культивирование в монослойной культуре. Как и в случае анализа клеток АЖ, существует большое число модификаций культивирования клеток ворсин хориона. Подробнее ознакомиться с ними можно в соответствующей литературе. Отметим лишь, что растущие первичные культуры имеют гетерогенный клеточный состав с преимущественным ростом фибробластоподобных клеток мезенхимальной стромы ворсин. Образование колоний или рыхлого монослоя обычно происходит к 10- 12-му дню культивирования. Основные принципы анализа культур клеток ворсин хориона и интерпретации результатов аналогичны таковым для культур клеток АЖ.

2. «Прямые» препараты ворсин хориона. Метод анализа «прямых» препаратов базируется на исследовании спонтанно делящихся клеток цитотрофобласта без их предварительного культивирования. Впервые препараты из ворсинчатой ткани хориона, содержащие метафазные пластинки удовлетворительного качества, без использования культуры клеток были получены группой миланских исследователей во главе с G. Simoiii. В последующие годы были предложены различные модификации метода, которые затрагшзают все этапы обработки ворсин. По существу все варианты метода можно разделить на две группы:
— собственно «прямой», основанный на кратковременной (2—3 ч) преинкубации нативных ворсин перед гипотонической обработкой и фиксацией;
— «полупрямой», предполагающий увеличение времени инкубации нативных ворсин в культуральной среде с питательными добавками до 24,48 или 72 ч.

Несмотря на кажущуюся простоту, эти способы редко дают стабильные результаты и поэтому, как правило, используются в сочетании с культивированием. Типичными недостатками описанных вариантов прямого метода являются малое число метафазных пластинок, артефактная утрата хромосом при мацерации образца в уксусной кислоте и малая пригодность хромосом для стандартной дифференциальной окраски красителем Гимза. Подсчет числа митозов на «прямых» и «полупрямых» препаратах показал, что при инкубации ворсин в течение 2- 3 сут митотическая активность клеток цитотрофобласта выше, чем при 2- или 24-часовой инкубации. Это позволило предположить, что в момент биопсии клетки испытывают «шок», при котором нарушаются параметры клеточного цикла, и не вступаютв митоз.

Нами разработаны собственные модификации прямого метода - метод «стряхивания-отпечатывания» и ускоренный прямой метод. Использование больших доз колхицина с одновременной обработкой в гипотоническом растворе позволяет получать препараты из хориона/плаценты в сроки беременности от 10 до 20нед, удовлетворяющие всем критериям кариотипирования. В сочетании с флюоресцентными методами дифференциальной окраски хромосом результативность этих методов превышает 99%.

Видео: Vision Cyto — Традиционная методика проведения цитологического анализа

Следует подчеркнуть, что эти модификации пригодны для приготовления препаратов хромосом из тканей с высокой естественной митотической активностью, включая любые ткани и органы зародыша. Интерфазные ядра, обработанные таким способом, вполне пригодны для FISH-метода со специфическими ДНК-зондами , что важно при верификации цитогенетического пренатального диагноза. Детально методики приготовления препаратов и варианты дифференциальной окраски описаны нами ранее.

Высокая эффективность, быстрота и надежность при минимальной себестоимости обеспечили быстрое внедрение этих модификаций в различных пренатальных диагностических центрах России и стран ближнего зарубежья.

Источник: http://meduniver.com