Диагностика на изолированных бластомерах. Диагностика патологии на стадии бластоцисты.

Диагностика на изолированных бластомерах позволяет получить точную информацию о генотипе эмбриона. В основном биопсия 1-2 бластомеров осуществляется у эмбрионов на стадии 8-10 клеток. Поскольку на ранних стадиях дробления все бластомеры тотипотентны (т.е. взаимозаменяемы), удаление нескольких клеток не сказывается на дальнейшем развитии эмбриона. Методически анализ единичных бластомеров от дробящихся зародышей принщЕгшально не отличается от анализа полярных телец.

Выбор метода молекулярной диагностики определяется спецификой исследуемой мутации и включает как ПЦР для одновременной детекции нескольких мутаций (мультиплексная ПЦР), так и более сложные ДНК-методы. Их применение позволяет проводить диагностику наиболее распространенных аутосомно-рецессивных моногенных болезней - муковисцидоза, талассемии, спинальной мышечной атрофии, болезни Тея — Сакса, а также аутосомно-доминантных - миотонической дистрофии, синдрома Марфана, хореи Гентингтона и Х-сцепленных — миодистрофии Дюшенна и синдрома ломкой Х-хромосомы.

Цитогенетическая доимплантационая диагностика проводится на 1-2 бластомерах FISH-методом с использованием ДНК-зондов, специфичных к прицентромерным районам хромосом 16, 18, 21, 13, X, Y. В случае гетерозиготного носительства транслокации одним из родителей предпринимаются попытки использования цельнохромосомных ДНК-зондов.

Проблема диагностики гетероплоидии осложняется высокой частотой хромосомного мозаицизма на ранних стадиях эмбриогенеза человека. Так, показано, что 38—46% морфологически нормальных эмбрионов на стадии 8-10 клеток имеют три и более анеуплоидных бластомера. Число бластомеров, различающихся по числу и набору хромосом, может достигать половины всех клеток зародыша. Поскольку заключение, основанное на анализе 1-2 клеток, не в полной мере отражает хромосомный статус формирующего зародыша вследствие высокой частоты аномальной сегрегации хромосом при дроблении зиготы, вероятность диагностических ошибок велика. Поэтому ДД может быть рекомендована в случаях высокого риска (25-50%) рождения ребенка с наследственной патологией.

Диагностика на стадии бластоцисты является одним из перспективных направлений ДД. На стадии бластоцисты зародыш состоит примерно из 60-100 клеток. При визуализации трофо- и эмбриобласта без ущерба для развития эмбриона можно удалить до 10 клеток трофобласта. Однако следует учитывать, что культивирование эмбрионов in vitro в программах экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) редко доводят до стадии бластоцисты, так как способность таких эмбрионов к имплантации может оказаться существенно сниженной. В то же время частота морфологически нормальных эмбрионов с мозаичной формой численных хромосомных аберраций остается достаточно высокой и достигает 40%.

Таким образом, основное (и единственное) преимущество доимплантационой диагностики заключается в возможности трансплантации генетически полноценных эмбрионов. Недостатками этого подхода являются: методические трудности, связанные с необходимостью работы с микроколичествами материала, ограничения диагностики рамками программ ЗКО и большая вероятность ошибочной диагностики, обусловленной сложностями анализа единичных клеток. Перспективы анализа большего числа клеток, безусловно, повысят разрешающую способность методов ДД. Однако при анализе даже нескольких клеток трофобласта проблема хромосомного мозаицизма остается нерешенной и, следовательно, не исключает необходимости проведения последующей ПД на постимплантационных стадиях.

В заключение отметим два основных обстоятельства, сдерживающих развитие доимплантационой диагностики в России. Во-первых, эти исследования даже в наиболее развитых отечественных центрах вспомогательных репродуктивных технологий пока находятся на стадии научных разработок. Это означает, что после проведения ДД и наступления долгожданной беременности после трансплантации оперированных зародышей на постимплантационных стадиях целесообразно провести ПД стандартными методами.

Во-вторых, доимплантационая диагностика невозможна без наличия высокоточного оборудования для молекулярных и цитогенетических исследований, прецизионной техники для микрохирургических операций яйцеклеток и бластоцист, высококвалифицированных специалистов - цитогенетиков, молекулярных биологов и эмбриологов и, конечно, специальных высококачественных реактивов, в том числе хромосом- и локус-специфических ДНК-зондов и расходных материалов. В результате этого ДД, безусловно, существенно увеличивает и без того высокую стоимость процедуры ЭКО и делает ее малодоступной для жителей России.

Источник: http://meduniver.com