Свойства активных центров антител. Реактивность иммуноглобулинов

Метод спиновой метки позволил также уловить различия в свойствах кроличьих антител к 2,4,6-тринитрофенилу (ТИФ) после первичной и вторичной иммунизации. Эти антитела исследовали с помощью отличных по пространственной структуре спин-меченых ТНФ-гаптенов как методом ЭПР, так и по уменьшению квантового выхода флуоресценции антител.

Обнаружено, что антитела, образуемые в ходе первичного и вторичного иммунных ответов, имеют различия в строении активных центров. Комплексы первичных антител с гаптенами являются менее жесткими и более чувствительными к действию органических растворителей и к стерическим изменениям лигандов.

Пиетт и сотрудники (Piette е. а., 1972) исследовали комплексы отрицательно заряженного спин-меченого бензоата и комплексы положительно заряженного спин-меченого триметилфениламмония с соответствующими кроличьими антителами. Судя по спектрам ЭПР, комплексы антител с отрицательно заряженными спин-мечеными гаптенами являются более жесткими, чем комплексы антител с положительно заряженными спин-мечеными гаптенами.
Кроме того, было обнаружено, что степень иммобилизации N—О-группы спин-меченого бензоата в активных центрах антител варьировала индивидуально у разных кроликов.

Хсиа и Пиетт (Hsia, Piette, 1969) исследовали перекрестную реактивность и структурную гетерогенность кроличьих анти-ДНФ-антител. Они сравнивали спектры ЭПР антител, выделенных с помощью гомологичного ДНФ -(анти-Д) и перекрестного гаптена (анти-Т) после взаимодействия со спин-меченым ДНФ (ДНФ-СМ). Aмакс спектра ЭПР комплекса анти-Д- и ДНФ-СМ оказалось равным 59 Гс, Амакс спектра комплекса (анти-Т+ДНФ-СМ) — 62 Гс.

Амакс является функцией времени корреляции и полярности окружения N—О-группы (Гамильтон, Мак-Коннел, 1970). Поэтому различия в этих спектрах ЭПР могут быть обусловлены или большей иммобилизацией группы N—О в комплексе (анти-Д+ДНФ-ОМ), или большей гидрофобностью ее окружения. В любом случае они указывают на структурные различия активных центров анти-Д и анти-Т.

В другой серии опытов исследовали комплексы анти-Д с гомологичным ДНФ-СМ и перекрестными спин-мечеными гаптенами орто- и паранитрофенолами: оНФ-СМ и nНФ-СМ. Амакс спектров ЭПР перекрестных спин-меченых гаптенов, аНХ-СМ и лНФ-СМ, расположенных в активных центрах, также оказалось больше, чем у гомологичного ДНФ-СМ.

Авторы объясняют это тем, что гомологичный гаптен расположен в активном центре таким образом, что N—О-группа метки непосредственно не взаимодействует с аминокислотными остатками активного центра. С другой стороны, перекрестный гаптен образует менее жесткий комплекс, при котором метка имеет большую степень свободы, что позволяет ей взаимодействовать с гидрофобными участками активного центра. Спектры ЭПР спин-меченых перекрестных гаптенов отличаются от гомологичного еще присутствием компонент, соответствующих более быстрому вращению.

Это может быть следствием существования равновесия между двумя орнентациями спин-мечепых гаптенов в активных центрах или неодинакового сродства у различных популяций антител, специфичных к соответствующему гаптену.

Источник: http://meduniver.com